- تعداد بازدید : ۱۶۵ بار
ترموسایکلر که به آن ترمال سایکلر (thermal cycler) یا ماشین PCR نیز گفته می شود، دستگاهی است که از آن برای انجام PCR (polymerase chain reaction) یا واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده می شود. طی این واکنش از قطعات DNA یا RNA کپی های زیاد در زمان کم تولید می شود. این واکنش در سه مرحله دمایی/زمانی به شرح زیر صورت می پذیرد:
۱-واسرشت (Denaturation):
در این مرحله در مدت زمان ۲۰ الی ۳۰ ثانیه و دمای ۹۴ الی ۹۸ درجه، رشته های DNA و پرایمر از هم گسسته می شوند و تک رشته های DNA به وجود می آیند.
۲-اتصال(Annealing):
در مرحله اتصال دمای محلول به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه به ۳۰ تا ۶۵ درجه ( با توجه به نوع آزمایش و نمونه) کاهش پیدا می کند. در این مرحله پرایمر ها به رشته های DNA الگو متصل می شوند.
۳-طویل شدن یا پلیمریزاسیون(Extension/Elongation or polymerization):
در این مرحله آنزیم DNAپلیمراز (DNA polymerase) به هیبرید پرایمر و DNA متصل میشوند و با استفاده از نوکلوتید های آزاد موجود در محلول رشته مکمل DNA الگو را می سازد. در این مرحله دمای محلول که در واقع دمای اپتیمم برای عملکرد آنزیم DNAپلیمراز است ۷۵ الی ۸۰ درجه است.
ترمال سایکلر
در دستگاه ترموسایکلر واکنش سه مرحله ای فوق به تعداد دفعات دلخواه صورت می پذیرد و تعداد DNA های موجود در نمونه به صورت تصاعدی و با فرمول ۲n افزایش می یابد. این دستگاه با دارا بودن قابلیت تنظیم دما و زمان تمامی مراحل واکنش زنجیره پلیمراز را با دقت انجام می دهد.
ازجمله کاربرد های PCRمی توان به تشخيص بيماري‌هاي قبل از تولد، تعيين جنسيت جنين، تشخیص بیماری ها، تشخیص سرطان و بررسی مراحل درمان آن، شناسائی میکروارگانیسم هایی که قابل کشت نیستند و یا سرعت رشد آنها در محیط کشت خیلی کند است، تحقیقات جنایی، انگشت نگاری ژنتیکی، بررسی DNA قدیمی، جداسازی DNAژنومی، تعیین توالی DNA، کلونینگ و بررسی موقعیت ژن ها بر رویDNA اشاره کرد.
ترمال سایکلر ساده
ترمال سایکلر استاندارد یا ساده یک دستگاه پایه برای ایجاد دوره های دمایی لازم برای انجام مراحل مختلف واکنش های PCR است. این دستگاه معمولا به گونه ای طراحی می شود که ویال ها و لوله های کوچک را در خود جای دهد و قابلیت تنظیمات اتوماتیک دما و زمان و تعداد دفعات انجام آزمایش را نیز داشته باشد.یکی از مهم ترین ویژگی هایی که در انتخااب این دستگاه بایستی به آن توجه شود سرعت در تغییرات دمایی یا ایجاد رمپ های دمایی در فواصل بین مراحل واکنش است.سرعت این تغییرات که به نوع سیستم حرارتی، بلوک حرارتی و سینک حرارتی دستگاه بستگی دارد عموما ۵ تا ۶ درجه سانتی گراد در ثانیه می باشد.این ترموسایکلر ها در سایزها و اشکال متفاوت با توجه به تعداد نمونه، نوع نمونه، نیاز به سرعت در جوابدهی و… ساخته شده است و از آنها در آزمایشگاه های سلولی و مولکولی، تحقیقات بیولوژیک، میکروبیولوژی، بیوتکنولوژی، ژنتیک و … استفاده می شود.
مشخصات اطلاعات شرکت فروشنده این محصول
ترموسایکلر که به آن ترمال سایکلر (thermal cycler) یا ماشین PCR نیز گفته می شود، دستگاهی است که از آن برای انجام PCR (polymerase chain reaction) یا واکنش زنجیره ای پلیمراز استفاده می شود. طی این واکنش از قطعات DNA یا RNA کپی های زیاد در زمان کم تولید می شود. این واکنش در سه مرحله دمایی/زمانی به شرح زیر صورت می پذیرد:
۱-واسرشت (Denaturation):
در این مرحله در مدت زمان ۲۰ الی ۳۰ ثانیه و دمای ۹۴ الی ۹۸ درجه، رشته های DNA و پرایمر از هم گسسته می شوند و تک رشته های DNA به وجود می آیند.
۲-اتصال(Annealing):
در مرحله اتصال دمای محلول به مدت ۲۰ الی ۴۰ ثانیه به ۳۰ تا ۶۵ درجه ( با توجه به نوع آزمایش و نمونه) کاهش پیدا می کند. در این مرحله پرایمر ها به رشته های DNA الگو متصل می شوند.
۳-طویل شدن یا پلیمریزاسیون(Extension/Elongation or polymerization):
در این مرحله آنزیم DNAپلیمراز (DNA polymerase) به هیبرید پرایمر و DNA متصل میشوند و با استفاده از نوکلوتید های آزاد موجود در محلول رشته مکمل DNA الگو را می سازد. در این مرحله دمای محلول که در واقع دمای اپتیمم برای عملکرد آنزیم DNAپلیمراز است ۷۵ الی ۸۰ درجه است.
ترمال سایکلر
در دستگاه ترموسایکلر واکنش سه مرحله ای فوق به تعداد دفعات دلخواه صورت می پذیرد و تعداد DNA های موجود در نمونه به صورت تصاعدی و با فرمول ۲n افزایش می یابد. این دستگاه با دارا بودن قابلیت تنظیم دما و زمان تمامی مراحل واکنش زنجیره پلیمراز را با دقت انجام می دهد.
ازجمله کاربرد های PCRمی توان به تشخيص بيماري‌هاي قبل از تولد، تعيين جنسيت جنين، تشخیص بیماری ها، تشخیص سرطان و بررسی مراحل درمان آن، شناسائی میکروارگانیسم هایی که قابل کشت نیستند و یا سرعت رشد آنها در محیط کشت خیلی کند است، تحقیقات جنایی، انگشت نگاری ژنتیکی، بررسی DNA قدیمی، جداسازی DNAژنومی، تعیین توالی DNA، کلونینگ و بررسی موقعیت ژن ها بر رویDNA اشاره کرد.
ترمال سایکلر ساده
ترمال سایکلر استاندارد یا ساده یک دستگاه پایه برای ایجاد دوره های دمایی لازم برای انجام مراحل مختلف واکنش های PCR است. این دستگاه معمولا به گونه ای طراحی می شود که ویال ها و لوله های کوچک را در خود جای دهد و قابلیت تنظیمات اتوماتیک دما و زمان و تعداد دفعات انجام آزمایش را نیز داشته باشد.یکی از مهم ترین ویژگی هایی که در انتخااب این دستگاه بایستی به آن توجه شود سرعت در تغییرات دمایی یا ایجاد رمپ های دمایی در فواصل بین مراحل واکنش است.سرعت این تغییرات که به نوع سیستم حرارتی، بلوک حرارتی و سینک حرارتی دستگاه بستگی دارد عموما ۵ تا ۶ درجه سانتی گراد در ثانیه می باشد.این ترموسایکلر ها در سایزها و اشکال متفاوت با توجه به تعداد نمونه، نوع نمونه، نیاز به سرعت در جوابدهی و… ساخته شده است و از آنها در آزمایشگاه های سلولی و مولکولی، تحقیقات بیولوژیک، میکروبیولوژی، بیوتکنولوژی، ژنتیک و … استفاده می شود.
مشخصات اطلاعات شرکت فروشنده این محصول
